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                  胼胝質含量生化檢測試劑盒(熒光法)

                  型 號

                  產品時間2024-11-22

                  所屬分類信號系列

                  報價1000

                  產品描述:胼胝質含量生化檢測試劑盒(熒光法)胼胝質(callose)是圍繞每個篩孔的邊緣積累的碳水化合物,是一種以β-1,3鍵結合的葡聚糖,在植物的篩管代謝、配子體發育等生命活動中發揮著重要的調節作用,其合成、分解直接關系植物正常的生長代謝過程。

                  產品概述

                  商品屬性:

                  產品名稱:胼胝質含量生化檢測試劑盒(熒光法)

                  規格:100/96  

                  貨號 : EY-01S1367

                  測試方法:熒光法   

                  分類:信號系列

                  商品詳情:

                  測定意義:

                  胼胝質(callose)是圍繞每個篩孔的邊緣積累的碳水化合物,是一種以β-1,3鍵結合的葡聚糖,在植物的篩管代謝、配子體發育等生命活動中發揮著重要的調節作用,其合成、分解直接關系植物正常的生長代謝過程。

                  測定原理:

                  胼胝質與苯胺藍染料反應,產生熒光物質,在激發波長400nm,發射波長500nm下熒光強度。

                  自備儀器和用品:

                  研缽、冰、低溫離心機、熒光酶標儀、黑色96孔板、可調式移液器、乙醇和蒸餾水。

                   

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                  1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

                  2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

                  3、血清等液體:直接測定。


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                  ADH測定操作:

                  1. 分光光度計預熱30 min,調節波長到340 nm,蒸餾水調零。

                  2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

                  3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2?!鰽測定管=A1-A2。

                  測定步驟:

                  1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

                  2、將試劑二在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

                  3、操作表:

                  試劑名稱μL

                  測定孔

                  樣本

                  20

                  試劑二

                  760

                  試劑三

                  10

                  試劑四

                  10


                  將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2。

                  注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

                  NAD-MDH活力單位的計算:

                  1、血清(漿)NAD-MDH活力的計算

                  單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

                  NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

                  2、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

                  (1)按樣本蛋白濃度計算:

                  單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

                  NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

                  (2)按樣本鮮重計算:

                  單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

                  NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

                  (3)按細菌或細胞密度計算:

                  單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

                  NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

                  V反總:反應體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;W:樣本質量,g;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;2000:細胞或細菌總數,2000萬。

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