技術文章/ARTICLES

亮發光桿菌基因現已整合到銀耳基因組中；RT-PCR成果顯現，在銀耳細胞中可以動物ELISA試劑盒檢測到人胰島素基因的mRNA；Southern雜交成果表明人胰島素基因以單復制的方式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗經過設置農桿菌與銀耳芽孢不同共培育時刻、誘導劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農桿菌ELISA試劑盒濃度等要素對轉化功率影響，成果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個/mL、農桿菌OD=0.5及共培育時刻為2d時，轉化功率zui高，為310個轉化子/108個銀耳芽孢。轉化子轉接5代后對潮霉素仍有抗性，說明外源基因在銀耳芽孢中可以不亂遺傳。在試驗室已開始樹立的農桿菌EHA105介導銀耳轉基因辦法的基礎上。
ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為動身菌株，經過凍融法將帶著有潮霉素磷酸轉移酶（Hph）基因為遺傳符號及人胰島動物ELISA試劑盒素基因（BAC）為意圖基因的質粒pBHg-BCA導入根癌農桿菌GV3101，LBA4404和AGL-1中，并進一步介導轉究。試驗結L-1具有較高的轉化率；GV3101轉化率較低，且假陽性較高；LBA4404無抗性菌落長出。此成果表明不同的農桿菌侵染銀耳芽孢才能具有差異性，且對受體侵染具有一定的特異性。本試驗以農桿菌EHA105為參照菌株，亮發光桿菌對農桿菌AGL-1介導轉化銀耳進行研究。基于農桿菌介導轉基因受許多要素的影響，本試驗從農桿菌與銀耳芽孢共培育時刻、銀耳芽孢濃度、農桿菌濃度、誘導劑乙酰丁香酮（AS）的濃度、轉率等方面進行優化。ELISA試劑盒其轉化條件優化成果為：AGL-1菌液OD值為0.4～0.5，AS誘導培育濃度為250μg/mL、共培育濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL，共培育72h轉化率zui高，可達500個/10~8，且陽性菌落為89%；EHA105菌液OD值為0.4～0.5。
1967/3/8        鹽酸硫胺標準品    500mg
1961/12/1    Dibucaine Hydrochloride    鹽酸地布卡因標準品    500mg
1959/5/2    Methotrexate     甲氨蝶呤標準品    500mg
1957/11/4    Stearic Acid     硬脂酸標準品    500mg
1957/10/3    Palmitic Acid     棕櫚酸標準品    500mg
    5-Adenylic Acid    5-腺嘌呤核苷酸標準品    500mg
        純化葡萄籽低聚原花青素標準品    500mg
    Purified Guggul Extract    純化香膠樹提取物標準品    500mg
    Lycopene     番茄紅素標準品    500mg
    Powdered Forskohlii Extract    弗司可林粉末提取物標準品    500mg
亮發光桿菌