技術文章/ARTICLES

亮發光桿菌實驗試劑 
采用T7• Tag Affinity Purification Kit
T7•Tag抗體瓊脂。B/W緩沖液：4.29mM Na2HPO4，1.47 mM KH2PO4，2.7 mM KCl， 0.137mM NaCl，1%吐溫-20，pH7.3 洗脫緩沖液: 0.1M檸檬酸，pH2.2. 中和緩沖液：2M Tris，pH10.4。 PEG 20000。
實驗步驟
1.100ml 含重組表達質粒的菌體誘導后，離心5000g×5min，棄上清，收獲菌體，用10ml預冷的B/W緩沖液重懸。
2. 重懸液于冰上超聲處理，直至樣品不再粘稠，4℃離心 14000g×30min，取上清液，0.45μm膜抽濾后作為樣品液。
3. 將結合T7•Tag抗體的瓊脂充分懸起，平衡至室溫，裝入層析柱中。
4. B/W緩沖液平衡后樣品液過柱。
5. 10ml B/W緩沖液過柱，洗去未結合蛋白。
6. 用5ml洗脫緩沖液過柱，每次1ml，洗脫液用含150μl中和緩沖液的離心管收集，混勻后置于冰上，直接SDS-PAGE分析。
7. 將洗脫下來的蛋白放入透析袋中，雙蒸水透析24hr，中間換液數次。
8. 用PEG 20000濃縮蛋白。
亮發光桿菌注意事項
蛋白在過層析柱前，要0.45μm膜抽濾，否則幾次純化后，柱子中會有不溶物。
含量測定    100mg    100619-200501    那格列奈
含量測定    50mg    100622-200401    鹽酸吉西他濱
含量測定    100mg    100625-200301    多索茶堿
HPLC法含量測定    100mg    100626- 200702     烏拉地爾
HPLC法含量測定    100mg    100627-200401    比卡魯胺
HPLC法含量測定    100mg    100628-200301    泛昔洛韋
含量測定    50mg    100629-200301    替米沙坦
亮發光桿菌