原代細胞的實驗要點:
1、本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2、所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3、蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4、如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5、如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
原代細胞的注意事項:
1、收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。
2、先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時,穩定細胞狀態,切忌在溫箱內靜置過夜。
3、靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
4、貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內的培養基,留8ml繼續培養至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
5、細胞瓶內的培養基含血清和雙抗,可收集后4℃保存備用,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基,一半用客戶自備的培養基,使細胞逐漸適應培養條件,以免因不適應而造成生長狀態不佳。
6、細胞胰酶消化液建議使用PBS配制,細胞運輸和保存:
可選擇干冰運輸及發送復蘇存方式:干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。